-INTRODUZIONE AL LABORATORIO DI BIOLOGIA
Norme di comportamento e sicurezza, precauzioni antinfortunistiche nella manipolazione di sostanze comuni in un laboratorio di biologia, dispositivi per la protezione individuale (DPI), utilizzo di vetreria, pipette e micropipette, strumentazione e materiale di uso comune in un laboratorio di biologia.
-PREPARAZIONE DI SOLUZIONI E TAMPONI BIOLOGICI
Definizione della concentrazione delle soluzioni, misura del pH delle soluzioni biologiche, preparazione e utilizzo dei tamponi biologici
-OMOGENIZZAZIONE E TECNICHE DI CENTRIFUGAZIONE
Metodi meccanici e fisici per la rottura di cellule e tessuti biologici, centrifughe e ultracentrifughe, tecniche di centrifugazione differenziale e in gradiente di densità
-TECNICHE SPETTROSCOPICHE
Lo spettrofotometro e le principali applicazioni della spettrofotometria, analisi quantitative dirette e analisi della concentrazione delle proteine attraverso i saggi colorimetrici, analisi enzimatiche e analisi qualitative. La spettrofluorimetria e l’utilizzo dei fluorofori in applicazioni biologiche.
-TECNICHE DI MICROSCOPIA OTTICA E A FLUORESCENZA
Microscopio ottico e a fluorescenza, microscopio confocale, elettronico, a trasmissione e a scansione. Utilizzo dei fissativi e preparazione di campioni istologici e cellulari per la microscopia ottica ed elettronica. Reazioni istochimiche e immunoistochimiche su micro-sezioni di tessuto e trattamenti per la visualizzazione dei componenti cellulari.
-METODI IMMUNOLOGICI
Produzione e utilizzo di anticorpi per applicazioni biologiche. Tecniche immunoenzimatiche (ELISA-Enzyme Linked Immunosorbent Assay), rivelazione immunochimica–western blot, tecniche immunoistochimiche e di immunofluorescenza.
-CITOFLUORIMETRIA
Caratteristiche principali di un citofluorimetro e principali applicazioni in ambito bioogico/clinico
-TECNICHE ELETTROFORETICHE
Principi dell’elettroforesi ed applicazioni di tecniche elettroforetiche per la separazione, visualizzazione e purificazione di molecole di interesse biologico. L’elettroforesi delle proteine: SDS-PAGE, page in condizioni native, isoelettrofocalizzazione, 2D-PAGE. L’elettroforesi del DNA su gel di agarosio.
-ESERCITAZIONE 1. Preparazione di soluzioni e tamponi biologici.
-ESERCITAZIONE 2. Prelievo di emolinfa e dissezione di ghiandola digestiva di Mytilus galloprovincialis; omogenizzazione, centrifugazione e preparazione di una frazione citosolica.
-ESERCITAZIONE 3. Utilizzo dello spettrofotometro per applicazione del metodo Lowry (saggio colorimetrico per la determinazione della concentrazione delle proteine di un estratto citosolico) e/o determinazione della attività enzimatica (da estratto citosolico); utilizzo del foglio di calcolo Excel
-ESERCITAZIONE 4. Colorazione di H&E su striscio di emolinfa e analisi di lipofuscina su sezioni criostatiche di ghiandola digestiva.
-ESERCITAZIONE 5. Tecniche elettroforetiche: separazione di DNA in gel di agarosio e utilizzo del foglio di calcolo Excel